5-Aza-dC和TSA对肝细胞癌细胞株中3-OST-2甲基化和基因表达的影响
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【摘 要】目的探讨5-Aza-dC和TSA对肝细胞癌(hepatocellularcarcinoma,HCC)细胞中3-OST-2甲基化水平、基因表达以及对核转录因子UHRF1(ubiquitin-likewithPHDandringfingerdomains1,也称为ICBP90/NP95)表达的影响。方法采用甲基化特异性PCR(methylationspecificPCR,MSP)法检测药物作用前后HCC细胞株中3-OST-2甲基化的状态改变;采用实时荧光定量RT-PCR法检测3-OST-2和UHRF1 mRNA的表达变化;采用细胞爬片免疫组化法检测UHRF1蛋白表达。结果3-OST-2在HCC细胞株中呈完全甲基化状态,5-Aza-dC或TSA均能部分逆转3-OST-2甲基化,其mRNA表达分别增加2.7倍和4.9倍,两种药物联合处理后,3-OST-2甲基化被完全逆转,其mRNA表达增加9.1倍。5-Aza-dC或TSA均能降低UHRF1mRNA和蛋白的表达,TSA比5-Aza-dC疗效更好(P〈0.01),两种药物联用具有协同作用(P〈0.01)。结论启动子甲基化和组蛋白修饰共同导致3-OST-2基因表达降低。5-Aza-dC和TSA单独作用均能部分逆转3-OST-2甲基化,增加其mRNA表达,抑制核蛋白UHRF1表达可能是其中机制之一。
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