miR-135a靶向调节SP1对人骨肉瘤细胞增殖和凋亡的影响
【出 处】:
【作 者】:
史栋梁
[1] ;
史桂荣
[2] ;
谢静
[1] ;
杜旭召
[1] ;
杨豪
[1]
【摘 要】目的 探讨miR-135a通过靶向调节SP1对人骨肉瘤(osteosarcoma,OS)细胞增殖和凋亡的影响。方法 收集人正常成骨组织和OS组织,培养正常成骨细胞(hFOB1.19)和OS细胞(MG-63),Real-timePCR法检测miR-135a和SP1的表达,West-ernblot法检测SP1表达。转染miR-135amimics和inhibitor,MTT法和BrdU-ELISA法检测OS细胞增殖变化,Western blot法检测凋亡蛋白Bax、BCL-2和Caspase3的表达。双荧光素酶报告基因检测miR-135a与SP1的靶定关系。Western blot法检测miR-135a对OS细胞中SP1表达的影响。Western blot法检测miR-135a对OS细胞中JAK2/STAT3表达的影响。结果 OS组织和细胞中miR-135a表达均显著降低,SP1表达均显著升高。转染miR-135amimics可降低OS细胞活性,减少BrdU阳性标记率。同时,miR-135amimics增加OS细胞Bax和Caspase3的表达,减少BCL-2的表达。miR-135amimics降低荧光素酶报告基因的荧光强度,结合位点突变后荧光素酶活性升高。上调miR-135a显著降低SP1的表达并降低JAK2和STAT3的磷酸化水平。miR-135ainhibitor作用均与mimics相反。结论 miR-135a可通过靶向调节SP1抑制人OS细胞增殖,诱导OS细胞凋亡,并下调JAK2/STAT3活化。
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