肿瘤BRCA1亚细胞定位对细胞放射线及PARP抑制剂敏感性的影响
【出 处】:
【作 者】:
姜桔红
刘静
李智
顾莹莹
广州医科大学附属第一医院呼吸疾病国家重点实验室/广州呼吸疾病研究所
广州510120
中山大学附属第一医院病理科
广州510080
【摘 要】目的 探讨肿瘤BRCA1细胞内定位对放射线和PARP抑制剂敏感性的影响。方法 采用siRNA干扰抑制乳腺癌细胞株MCF7内源性BRCA1表达,转染BRCA1细胞内定位不同的载体:pCMV-3xFlag-WT-BRCA1、pCMV-3xFlag-NES-BRCA1、pC-MV-3xFlag-NLS-BRCA1。采用免疫荧光法检测BRCA1的细胞定位及细胞核γ-H2AX和Rad51核焦点形成,应用流式细胞技术检测细胞凋亡,克隆形成实验检测体外细胞存活。结果 转染WT-BRCA1 mutant有47%细胞核表达,23%细胞质表达,30%细胞质和细胞核均表达,NES-BRCA1 mutant表达主要于细胞核(87%);NLS-BRCA1 mutant定位于细胞质(82%)。WT-BRCA1 mutant、NES-BRCA1 mutant和NLS-BRCA1 mutant三种载体转染的细胞4Gy放射处理后2h,Rad51核焦点阳性细胞数分别为87%、84%及13%;放射后24h,γ-H2AX核焦点阳性细胞分别为22%、25%及59%。NLS-BRCA1 mutant转染细胞较WT-BRCA1 mutant和NES-BRCA1 mutant转染细胞ABT-888和放射处理后诱导的凋亡细胞增加,克隆存活减少。结论 BRCA1的细胞内定位影响DNA双链断裂同源重组修复,并可预测肿瘤对放射和PARP抑制剂的敏感性。
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