骨肉瘤中Axl抑制凋亡及与凋亡蛋白的相关性
【出 处】:
【作 者】:
蒋念
王雪迪
田锐
谢显彪
赖英荣
彭挺生
中山大学附属第一医院病理科
广州510080
中山大学附属第一医院骨肿瘤科
广州510080
【摘 要】目的探讨受体酪氨酸激酶Axl在骨肉瘤中的抗凋亡作用,分析磷酸化Axl(P—Axl)与抗凋亡蛋白之间的相关性。方法常规培养骨肉瘤细胞株MG63、143B和U20S,分别设立人重组蛋白Gas6刺激组、Axl siRNA转染组、Gas6刺激+Axl siRNA转染组及各阴性对照组,应用顺铂(DDP)或氨甲喋呤(MTX)致使细胞凋亡后,通过Hoechst 33258染色、MTT实验、Annexin V—FIFC等检测法统计分析不同处理组问细胞凋亡率的差异及不同浓度Gas6刺激后骨肉瘤细胞的细胞周期变化;采用免疫组化EnVision两步法检测41例骨肉瘤及18例骨纤维结构不良组织中P—Axl、BCL-2及Bax的表达,分析患者预后与三者的相关性;应用TUNEL染色分析骨肉瘤组织中P—Axl表达水平与细胞凋亡率的相关性。结果Hoechst33258、MTr、Annexin V—FIFC等的实验结果一致,均表明骨肉瘤细胞株MG63、143B和U20S中Gas6通过活化Axl降低DDP或MTX导致的细胞凋亡率(P〈0.05),Axl siRNA则引起细胞凋亡率增加(P〈0.05),在Axl siRNA干扰前Gas6预刺激有降低凋亡率的趋势。41例骨肉瘤组织中P.Axl、BCL-2、Bax的阳性率分别为85。4%、70.7%及36.6%;18例骨纤维结构不良组织中三者阳性率分别为11.1%、22.2%及11.1%,两组相比骨肉瘤组织中P—Axl、BCL-2、Bax的表达明显增高(P〈0.05)。Pearson相关性分析显示BCL-2表达与P—Axl呈显著正相关(r=0.842,P〈0.0001);Cox单因素风险回归分析发现BCL-2和Bax表达是影响患者预后的预测因素;TUNEL结果显示P—Axl高表达的骨肉瘤组织中细胞凋亡率明显降低(P〈0.05)。结论骨肉瘤中Gas6/Axl活化后通过调节凋亡蛋白BCL-2,抑制由DDP或MTX诱发的细胞凋亡,从而促进肿瘤的进展。